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上海研生生化試劑有限公司

體外培養的細胞

時間:2015-12-23閱讀:425
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    體外培養的細胞按照生長方式分為兩種:貼壁細胞和懸浮細胞。

(1)貼壁細胞

    細胞沿著培養容器的支撐面生長,細胞首先鋪滿容器,如果繼續生長,部分細胞以*層細胞為支撐繼續生長,體外培養的大部分細胞屬于貼壁細胞。根據細胞的生長形態大致分為下面4種類型:

①成纖維細胞:是疏松結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質細胞(mesenchymalcell)分化而來,數目zui多,細胞大,多為突起的紡錘形或星形的扁平細胞,細胞核呈規則的卵圓形,胞質突起,生長時呈放射狀。除真正的成纖維細胞外,凡由中胚層間充質起源的組織,如心肌、平滑肌、成骨細胞、血管內皮等常呈本型狀態。另外,凡培養中細胞的形態與成纖維類似時也可稱之為成纖維細胞。

②上皮細胞:位于皮膚或腔道表層的細胞,細胞呈扁平不規則多角形,*有圓形核,細胞彼此緊密相連成單層膜。生長時呈膜狀移動,處于膜邊緣的細胞總與膜相連,很少單獨行動。起源于內、外胚層的細胞如皮膚表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形態;

③游走細胞:能夠在組織內自由移動的細胞,呈散在生長,一般不連成片,胞質常突起,呈活躍游走或變形運動,方向不規則。如哺乳動物的小淋巴細胞、嗜中性白血細胞等。

④多形細胞型:難以確定其規律和穩定的形態的細胞,如神經細胞、多形T細胞等。

(2)懸浮細胞

    細胞分散在培養液中,呈懸浮生長,一般成圓形,這類細胞容易大量繁殖,如某些類型的癌細胞及白血病細胞。

1)其他細胞分離技術

(1)熒光分離技術

    熒光分離技術也稱為熒光激活分選法,它首先對細胞進行熒光染色,標記上特定的熒光,然后將細胞懸液稀釋到一定濃度,保證細胞可以單個通過檢測器,當有光信號打到細胞表面時,檢測散射光,按照設定的標準將細胞分流到不同的收集管。這種分離方法需要借助熒光激活的*(如流式細胞儀)來完成。

(2)電泳分離技術

    在一定PH值下細胞表面帶有凈的正或負電荷,能在外加電場的作用下發生泳動,這種現象稱為細胞電泳(cell electrophoresis)。各種細胞或處于不同生理狀態的同種細胞電荷量有所不同,因而在一定的電場中的泳動速度不同,從而實現細胞分離的目的。

3)常用于組織消化的酶種類

(1)*

    從牛、羊或豬的胰臟中提取的一種蛋白水解酶,它能從多肽鏈中的賴氨酸和*殘基中的羧基側。*通過水解黏結相鄰細胞的糖蛋白,從而使細胞之間分離。根據提取純度的不同,蛋白酶分為精制和粗制*,粗制*因含有其他蛋白酶,所以比精制*分離細胞的活性好,但雜蛋白酶可能導致粗制*的毒性要比精制的高。

(2)膠原酶

    能特異性地降解胞外膠原蛋白,使膠原蛋白和纖維粘連蛋白的網狀結構解離,而不損壞細胞表面結構的完整性。商業化的膠原酶產品一般是梭狀芽孢桿菌裂解液的粗提物,是膠原酶、*等蛋白水解酶混合物,能降解膠原蛋白和其他蛋白,及多糖等胞外大分子物質,適用于多種組織的消化應用。

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