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超好用的豬瘟(csfv)病毒免疫熒光檢測試劑盒

時間:2020/7/29閱讀:1574
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 超好用的豬瘟(csfv)病毒免疫熒光檢測試劑盒

信帆生物供應豬瘟(csfv)病毒免疫熒光檢測試劑盒,產品操作簡單,質量穩定,現貨供應!

產品簡介
豬瘟病毒免疫熒光技術是根據抗原抗體反應的原理,單克隆抗體先與病毒反應,然后間接的與熒光抗鼠二抗反應,用這種熒光抗體檢測細胞內的豬瘟病毒含量。
產品內容

【備用的器材】
長滿單層的  ST細胞1瓶
排槍
排槍配套使用的槍頭
加樣槽
離心管
96孔細胞培養板兩塊       ST細胞
【試劑配置】
6%MEM培養基:MEM培養基+6%豬瘟血清
2%MEM培養基:MEM培養基+2%豬瘟血清
熒光二抗工作液:將濃縮熒光二抗按照1:50稀釋(用樣品稀釋液稀釋50倍,現用現配)
【操作步驟】
用6%MEM培養基將st細胞鋪96孔板一個(細胞密度為3*105/ml),次日棄上清接毒。
接毒步驟如下:
1. 無血清培養基將病毒液作連續10倍的稀釋,從100-10-8。
2. 將稀釋好的病毒接種到96孔培養板中,每一稀釋度接種一縱排共8孔,每孔接種100微升。
3. 放置于37℃吸附1小時后,補入2%MEM培養基每孔100ul,置于37℃CO2培養箱培養。
4. 設正常細胞對照,正常細胞對照作兩縱排。
5. 逐日觀察,一般需要觀察120小時即可測定熒光。
熒光測定步驟如下:
1.棄掉96孔細胞培養板上清,每孔加入150微升樣品稀釋液,靜置30秒,甩去孔內液體,重復洗3次,吸干水分,不用拍板。
2. 每孔加入50微升-20℃的固定液放入-20℃靜置20分鐘,棄掉上清,不用拍板。
3.同上(一步)重復洗滌3次,吸干水分,不用拍板。
4. 每孔加入一抗工作液50ul,蓋上蓋板膜,放置于37℃40分鐘后,同上(一步)重復洗滌3次,吸干水分,不用拍板。
5. 每孔加入熒光二抗工作液50ul,蓋上蓋板膜,放置于37℃40分鐘后,同上(一步)重復洗滌3次,吸干水分,不用拍板。
6. 觀察熒光顯微鏡并根據下表記錄不同稀釋度的熒光孔數,之后根據10-1~10-8計算出病毒的TCID50含量。
例:

LgTCID50=l-d(s-0.5)      
L:高稀釋度的對數
D:稀釋度對數之間的差
S:陽性孔比率總和
LgTCID50=l-d(s-0.5) =-1-1*(3.375-0.5)=-3.875
  TCID50=10-3.875/ml
即:將該病毒稀釋10-3.875接種100ul可使50%的細胞發生病變。   
【注意事項】
(1)切記做不接毒的空白細胞對照。
(2)樣稀清洗與加樣時要溫柔,并從同一個位點加入。
(3)加樣槽用前請用一次性塑料手套套住,加不同溶液時更換手套,防止不同溶液的交叉污染。
(4)配制好的熒光二抗避光保存,現配現用,固定液放-20℃ 1h后再使用。
(5)操作過程中的移液、計時和洗滌必須精確,以免影響結果。
(6)被測病毒-20化開后需要及時接毒,不可放置室溫;配置好的培養放4℃于30天內使用。
(7)如果不需要TCID50數值,請根據100~10-8直接觀察熒光顯微鏡即可。
【貯藏與有效期】
低溫避光保存,有效期為12個月。
【產品規格】2*96T

 超好用的豬瘟(csfv)病毒免疫熒光檢測試劑盒

 

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