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ELISA試劑盒實驗“花板“問題的分析和解決

時間:2016/2/22閱讀:1379
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     ELISA試劑盒結果“花板”的問題對檢測數據造成了很大影響,往往會使檢測者做出誤判,是實驗中必須要注意和避免的。

  使用對血液HBsAg-HCV-HIV及梅毒等實驗檢測的結果中,空白和陰性,陽性對照以及室內質控孔結果正常,根據衛生部臨檢中心提供的數據,HBsAg0.5ng1ng-HCV-HIV梅毒正常范圍均為2NCU,但血液標本孔的OD值比較高(大多數OD值≥0.070)。標本的陽性率很高,每板除對照孔外,有時陽性高達10孔之多,而大多數真陽性標本都出現弱陽性結果。

  針對這種“花板”現象我們通過多次實驗的分析和判斷,總結了一些經驗,分析如下:

  1、ELISA實驗標本、試劑、儀器

  1)標本 出入境人員的血液標本。

  2)試劑 HBsAg、HCV、HIV、梅毒試劑均為不同廠家的ELISA試劑盒。

  3)儀器 LD4-2型腦心機BID RAD1575型洗板機BID RAD550酶標儀。

  2、方法

  所有被檢出入境人員的血液標本,按照各個廠家提供的ELISA試劑盒說明書進行HBsAg-HCV-HIV梅毒等檢驗項目操作。所有試劑均在有效期內使用。

  3 結果

  所使用不同廠家的試劑有時會出現“花板”問題。

  4、ELISA試劑盒分析

  在所有標本進行檢測的過程中,所用的儀器及加樣過程都處于正常狀態的情況下,步驟均按照各種試劑說明書的要求去做,排除實驗所用儀器和操作步驟對實驗結果的影響外,ELISA試劑盒內的空白、陰性和陽性對照以及室內質控值都很正常,只有檢測的血液標本情況異常。根據國家和疾控中心報告陽性率的比例不應該是很高的情況下,HBsAg在用ELISA之前都經過了快速金標試劑的檢測,陽性標本得到了一定的控制。因此,原因可能是在標本的處理,特別是放置時間、離心速度和離心時間方面的問題。所以,標本的處理就成為實驗結果的主要可疑因素。

  為了避免“花板”現象的出現,降低檢測的假陽性率,獲取準確的實驗結果,應選擇靈敏度高、特異性好、穩定性好、批間差小、操作方便省時的ELISA試劑。

  實驗過程中應該注意的問題:

  (1)抽取樣本時應抽出足夠檢驗量的血液標本,按比例加抗凝劑,便于離心,得到足夠的血清(血漿)。

  (2)血液標本應置于室溫下1~2h,使血液凝固收縮,然后離心檢測或讓血液過夜后再檢測。這樣才能使得血液充分收縮,讓標本中的非特異性物質所致的假陽性率降至zui低。

  (3)檢測之前,加大離心轉速,盡量延長時間,使血細胞和纖維蛋白充分沉淀,讓血細胞與血清*分離。

  (4)加樣時不能加入紅細胞或纖維蛋白,要按照操作說明書去做,否則會影響實驗結果。

  (5)封板溫育時,各孔一定要封嚴,防止陽性標本的液體蒸發,產生周邊現象從而導致“花板”的出現。

  (6)手工洗板時應注意液體被濺出或孔與孔之間的液體溢出,連成整體液面后產生“花板”。用洗板機洗板時應防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過程中易產生拖帶現象而導致“花板”的出現。

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