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細胞培育進程中的技巧

閱讀:101發布時間:2017-9-27

1. 挑選的培育基開發戰略
在細胞培育進程中,培育基是操控產品質量、產值和本錢的zui重要要素。有必要針對每種培育物來定制培育基,以優化試驗效果。在決議以哪種方式來開發您的培育基時,您有幾個挑選。您可以購買現成的,自己開發,也可以與另一家公司合作開發特定的培育基。在這個進程中,您需求考慮時刻和本錢等要素。
2. 制造干粉培育基時評價水的質量
液體培育基往往會帶來比干粉培育基更高質量的效果。這可能與水的質量有關。由于細菌在水中敏捷成長,故需求監控內毒素及其他污染物。商業公司有資源來監控和操控細菌成長,比方過濾器。因而運用商業化出產的液體培育基會愈加可靠一點。
3. 利用細胞的代謝特性來優化培育基
剖析運用過的培育基,有助于判定必要成分的代謝速率,包含氨基酸和維生素。從細胞成長階段和蛋白出產階段收集到的動態代謝圖譜可用來平衡基礎培育基和增加培育基,指導培育基的要點,有助于蛋白質的出產。
4. 防止細胞的過度消化
*經過消化擔任讓細胞與容器結合的蛋白質,而實現貼壁細胞的傳代。如果細胞暴露在*中時刻太長,則*將開端切開細胞外表蛋白,這會影響細胞行進正常功用的才能。
5. 培育基中不要一向運用抗生素
跟著細胞培育物愈加頻頻地暴露在抗生素中,對抗生素有著天然耐藥性的菌株將開端呈現。這種現象可掩蓋潛在的污染,這對試驗對錯常有害的。
6. 保證一切試驗室資料都無菌
交叉污染是細胞培育的大敵。即使是zui輕微的污染,也可能毀了幾個星期的效果。因培育箱內溫暖濕潤,真菌極易成長,因而有必要留意定時清潔。此外,在將培育瓶、移液管及其他的相關物品放入超凈臺之前,運用酒精擦洗潔凈,以防止污染。
7. 當心處理您的培育物
細胞培育的脆弱性怎樣著重也不為過。劇烈搖晃,或連續的溫度動搖可能會對成長產生晦氣的影響。保證培育箱是水平的,溫度均一,且遠離電動儀器。此外,盡量防止一次處理多個細胞系,由于它可能會影響細胞的基因型和表型。您還應定時完結STR圖譜剖析,以承認細胞系的身份。
8. 在運用前正確凍結細胞
雖然凍結看起來是個簡略的進程,但有必要操作妥當,以免損傷細胞。長時刻暴露在高溫條件下會使細胞無法鋪板。因而,凍存管應當在37°C水浴中放置2分鐘,然后用條件培育基稀釋,以防止DMSO形成直接損傷。
9. 運用對數成長期的細胞
細胞培育進程共有3個階段:停滯期、對數期和渠道期,分別代表了低細胞成長、高細胞成長和無細胞成長。zui有生機的細胞是健康的,快速分裂的,在對數期以70-80%的集合度存在。
10. 在傳代之前不要讓細胞*集合
集合度是指貼壁細胞占有培育瓶外表積的比例。*集合意味著100%的外表都被貼壁細胞掩蓋。一定要防止這種狀態,由于它意味著細胞不能繼續成長。不過,燃眉之急是運用活潑成長的細胞。

 


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