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技術(shù)文章

試驗室細(xì)胞搜集的具體辦法過程

閱讀:223發(fā)布時間:2017-9-11

試驗室細(xì)胞搜集的具體辦法過程,試驗室搜集細(xì)胞,關(guān)于細(xì)胞的研討極為重要,如何搜集細(xì)胞成為試驗室的必做項目之一,那么下面上海紀(jì)寧的博士就帶大家一同來了解下以下三種辦法:

WB搜集細(xì)胞:
將細(xì)胞培養(yǎng)基棄掉,用PBS清洗兩次,運(yùn)用*消化細(xì)胞或細(xì)胞刮,將細(xì)胞懸濁液離心1000rpm/5min,棄上清,保存底層細(xì)胞。如要裂解細(xì)胞6孔板(99ulRIPA+1ulPMSF),細(xì)胞培養(yǎng)皿(198ulRIPA+2ulPMSF),若要做磷酸化蛋白則加如1ul按捺磷酸化蛋白降解按捺劑,參加細(xì)胞裂解液后用移液器將細(xì)胞吹勻,冰上靜置5min,離心4℃ 12500g/5min,汲取上清液,置于-80℃冰箱;若不裂解細(xì)胞,將細(xì)胞置于-80℃冰箱。

一般PCR搜集細(xì)胞:
將細(xì)胞培養(yǎng)基棄掉,用PBS清洗兩次,運(yùn)用*消化細(xì)胞或細(xì)胞刮,將細(xì)胞懸濁液離心1000rpm/5min,棄上清,保存底層細(xì)胞。將細(xì)胞置于-20℃冰箱。

qRT-PCR搜集細(xì)胞:
將細(xì)胞培養(yǎng)基棄掉,用PBS清洗兩次,運(yùn)用*消化細(xì)胞或細(xì)胞刮,將細(xì)胞懸濁液離心1000rpm/5min,棄上清,保存底層細(xì)胞。參加1ml TRIZOL,置于-80℃冰箱。(留意:本試驗需運(yùn)用耗材和試劑都為無RNA酶,PBS有必要高壓,離心管和槍頭有必要無酶


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