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牛Ⅲ型膠原(COL3)ELISA試劑盒本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中待測物質水平。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被單抗的微孔中依次加入待測物質,再與HRP標記的抗原抗體結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測物質呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中待測物質的濃度。
注意事項:牛Ⅲ型膠原(COL3)ELISA試劑盒標本的處理:
(1)細胞培養上清液 根據需要用試劑盒中的標準稀釋液稀釋樣品,然后按照說明書所述方法檢測。推薦稀釋濃度是稀釋5倍。
(2)腦脊液 根據需要用試劑盒中的標準稀釋液稀釋樣品,然后按照說明書所述方法檢測。推薦稀釋濃度是5倍。
(3)血漿 ①用EDTA2K離心收集在真空血液收集管中的血液,5,000×g,15分鐘,4℃,分離血漿樣品,然后儲存在零下80℃直到使用。②用試劑盒中的標準稀釋液5倍稀釋血漿以避免血漿中的干擾物質影響檢測,按照說明書方法檢測。
分析原理:牛Ⅲ型膠原(COL3)ELISA試劑盒是基于標準的雙抗夾心酶聯免疫分析技術。將人腫瘤 壞死因子受體超家族成員B特異性抗體包被于96孔板中人腫瘤壞死因子受體超家族成員B的檢測抗體為生 物素標記抗體試驗樣品和生物素標記的檢測抗體相繼加入到96孔中,然后洗滌平板。生物素-HRP加入96 孔中,未與生物素標檢測抗體結合的,被洗滌緩沖液洗掉HRP的底物TMB可與HRP(辣根過氧化物酶)發生 酶促反應。TMB被HRP催化后變成藍色物質,在加入酸性終止液后變為黃色。黃顏色的深淺與人腫瘤壞死因 子受體超家族成員B樣品被捕獲的量成正比。
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