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免疫熒光非特異性染色
二甲苯脫蠟 過夜
其余的脫蠟、水化每個3分鐘
TBS清洗3次
0.2%胰酶修復 37度 過夜
高壓加枸櫞酸修復 3分鐘
一抗室溫孵育 過夜 濃度1:100
TBS清洗3次
熒光二抗孵育 37度 1小時 濃度1:200(也嘗試過室溫過夜)
TBS清洗
猝滅劑封片
做免疫熒光,出現非特異性染色,目的熒光應該在胞質可是胞核部位的非特異性染色特別強,我的染色步驟是PBS洗三遍,4%多聚甲醛固定30min,pbs洗三遍,0.2%Triton x-100 5min,pbs洗三遍,5%山羊血清 30min,一抗 37度 1h,pbs 洗三遍,二抗 37度 1h,pbs 三遍,hoechst 2min,pbs洗三遍
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