總蛋白定量方法簡介及優缺點

蛋白質定量是生物學實驗*的部分，該技術被廣泛的用于多個領域和行業，包括生物學科、食品檢驗、臨床檢驗、疾病診斷等。在實際應用操作過程中，對樣本中蛋白質進行準確可靠的定量分析，是常用且重要的工作。盡管目前有多種總蛋白定量的方法，但是由于蛋白質種類繁多，結構復雜，分子量差異大，且功能各異，暫無理想而通用的蛋白質定量分析方法。現介紹目前常用的定量方法以及優選點，實驗工作者可根據實驗需要，選取合適的定量方法。

蛋白定量法可分為以下兩大類，化學檢測法，包括福林-酚法（Lowry）、二喹啉甲酸法（BCA）、凱氏定氮法（Kjeldahl）、雙縮脲法（Biuret）、考馬斯亮藍法（Bradford）；光學檢測法，包括紫外光檢測和熒光檢測等。現簡單介紹常用的二喹啉甲酸法（BCA法和紫外光檢測法。

1.. 二喹啉甲酸法

原理：Lowry法的改進方法，原理為蛋白質分子中肽鍵與二價銅離子形成絡合物，并還原成亞銅離子（一價銅）。BCA在堿性條件下能與亞銅離子形成穩定的紫藍色復合物，其顏色深淺與蛋白質濃度成正比，復合物在562nm處有高的光吸收值。蛋白濃度范圍約在5-200ug/ml。原理圖如下：

優點：準確靈敏（微量檢測的靈敏度可達0.5ug/ml），測定快速簡便，經濟實用。干擾物質少，試劑及其形成的顯示復合物穩定性好，檢測不同蛋白質分子的變異系數較小。

缺點：⑴對去污劑敏感：TWEEN，Triton X-100，SDS。⑵蔗糖，尿素，銨鹽，EDTA影響測定結果。⑶zui主要的缺點是不同的標準品會導致同一樣品結果差異較大，無可比性。

2.紫外光檢測

原理：蛋白質分子中酪氨酸，苯丙氨酸和色氨酸殘基使其在280nm處具有紫外吸收，其吸光度值與苯環中共軛雙鍵的含量成正比,檢測zui低濃度可達到10ug/ml。

優點：簡便，靈敏，快速，不消耗樣品。測定后能回收。

缺點：⑴測定蛋白質含量的準確度和專一性較差。

⑵干擾物質多，若樣品中含有嘌呤，嘧啶和核酸等能吸收紫外光的物質，會出現較大的干擾。