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北京雅安達生物技術有限公司

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牛銅藍蛋白(CP)ELISA kit北京低*

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更新時間:2016-05-25 23:15:21瀏覽次數:729次

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牛銅藍蛋白(CP)ELISA kit

 

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主營產品: ELISA試劑盒,生物試劑,免疫組學,生物抗體,蛋白組學,分子生物等。

ELISA試劑盒所需要樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。

2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右  2000-3000/分)去除顆粒。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清   。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20保存,但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

生化試劑應用常見問題:

1 試劑空白

1 線性范圍變窄 現象:高值測不高。原因:生產試劑時有效成分投料量不足;試劑成份穩定性較差。12 靈敏度變低現象:酶促反應速度曲線斜率下降,測定結果有嚴重系統誤差。原因:試劑底物濃度不足。13 低值偏高 現象:試劑空白的變化曲線吸光度VS時間明顯波動。原因:試劑自身不穩定,自行分解;工具酶純度不夠,雜酶含量超限,導致干擾作用。

2 樣品信息

樣品的溶血、脂血、黃疸等會對測定結果產生非化學反應的干擾。因此,應根據溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性,采用雙波長或多波長的檢測模式,并在結果計算中扣除因溶血、脂血、黃疸引起的影響,減少干擾程度。

3 測定范圍

每種待測物都有一個可測定的濃度或活性范圍,樣品結果若超過此范圍,分析儀將顯示結果超過范圍的提示。表示試劑已經變質,應更換合格試劑。

4 底物耗盡

使用連續監測法、兩點法測定酶活性時,若酶活性非常高,底物接近被耗盡,吸光度上升或下降會超過某一吸光度變化范圍,監測期的吸光度將偏離線性,使測定結果不可靠。

5 酶的預活化

測定血清中的某些酶,如CK,離體采血后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基SH)被氧化造成的。只有通過適當的還原作用才能重新激活。如CK—NAC試劑盒即含有CK活化劑,名為N一乙酰半*。實驗研究證明,NAC對血清中已失活的CK活化過程約需180 S。這就是CK測定為什么要延遲時間較長的理論依據。在AST,ALT采用IFCC*方法測定時需要磷酸吡哆醛預活化。需要強調:含有活化劑的生化試劑,其測定酶活性的結果要高些。了解更多詳細信息

 

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