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北京雅安達(dá)生物技術(shù)有限公司

大鼠α干擾素(IFN-α)elisa試劑盒使用說明書

時(shí)間:2013-10-18閱讀:326
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大鼠α干擾素(IFN-α)試劑盒試劑盒用途】

定量檢測大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中α干擾素(IFN-α)的含量。

【大鼠α干擾素(IFN-α)試劑盒檢測原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本加入到預(yù)先包被大鼠α干擾素(IFN-α)單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,再加入酶標(biāo)工作液,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中大鼠α干擾素(IFN-α)濃度呈正相關(guān),450nm波長下測定OD值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,計(jì)算樣本中大鼠α干擾素(IFN-α)含量。

 

【大鼠α干擾素(IFN-α)試劑盒樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因?yàn)榀B氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。

2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、樣本應(yīng)充分離心,不得有溶血及顆粒。

【大鼠α干擾素(IFN-α)試劑盒注意事項(xiàng)】

1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

2、酶標(biāo)包被板開封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實(shí)驗(yàn)誤差。

4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

5、本試劑盒定量范圍為1.25-40ng/L,超過此范圍,為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得,不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準(zhǔn)確結(jié)果(1.25-40ng/L范圍內(nèi)),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。

6、若顯色過淺,可適當(dāng)延長底物溫育時(shí)間。

7、為避免交叉污染,標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照每加一個(gè)就要更換一次吸頭;酶標(biāo)工作液、*和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復(fù)使用封板膜。

8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號(hào)的試劑不得混用。

9、底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。

【大鼠α干擾素(IFN-α)試劑盒試劑盒組成】

 

1

酶標(biāo)包被板

12孔×8條

7

顯色劑A液

6mL

2

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL×6管

8

顯色劑B液

6mL

3

20倍濃縮洗滌液

25mL

9

終止液

6mL

4

*

6mL

10

說明書

1份

5

特殊稀釋液

6mL

11

封板膜

2張

6

酶標(biāo)試劑

6mL

12

密封袋

1個(gè)

 

備注:標(biāo)準(zhǔn)品(1號(hào)→6號(hào))濃度依次為:40、20、10、5、2.5、1.25ng/L.

 

【大鼠α干擾素(IFN-α)試劑盒需要而未提供的試劑和器材】

1、37℃恒溫箱

  1. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
  2. 精密移液器及一次性吸頭
  3. 蒸餾水
  4. 一次性試管
  5. 吸水紙

【大鼠α干擾素(IFN-α)試劑盒操作步驟】

1、準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,固定于框架上,分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加*40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。

4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板)。

6、加酶標(biāo)工作液:每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,空白對照孔不加。

7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板)。

9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯色15min。

10、終止:取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11、測定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。

12、計(jì)算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值,計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計(jì)算出對應(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。zui終濃度為實(shí)際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

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